發(fā)布時(shí)間： 2024-10-18 點(diǎn)擊次數(shù)： 181次
內(nèi)皮素（Endothelin,ET）是一組由內(nèi)皮細(xì)胞合成并分泌的小分子多肽，參與血壓調(diào)控、血管收縮及炎癥反應(yīng)等多種生理病理過程。在臨床研究中，通過檢測血液或其他體液中內(nèi)皮素水平，可以為心血管疾病、腎病等疾病的診斷及療效評(píng)估提供重要參考。本文將為您介紹如何使用
人內(nèi)皮素ELISA試劑盒進(jìn)行樣本檢測，并分享一些入門操作技巧。
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
試劑準(zhǔn)備：確保所有試劑均處于有效期內(nèi)，并按說明書要求提前恢復(fù)至室溫。
器材準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好微量移液器、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)等實(shí)驗(yàn)所需設(shè)備，并確保其處于良好狀態(tài)。
樣本準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，采集新鮮血液樣本，并及時(shí)分離血清或血漿。避免反復(fù)凍融，以防影響檢測結(jié)果。
二、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：按照說明書指示，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品原液依次稀釋成不同濃度梯度。
加樣操作：使用移液槍分別吸取各濃度標(biāo)準(zhǔn)品加入微孔板中，每個(gè)濃度設(shè)2-3個(gè)復(fù)孔。
孵育處理：蓋上封板膜，放入37℃恒溫孵育箱內(nèi)孵育特定時(shí)間。
洗滌步驟：取出微孔板，使用洗板機(jī)或手工逐孔加洗液，靜置后甩干，重復(fù)多次。
顯色反應(yīng)：加入顯色劑A和B，避光放置直至出現(xiàn)顏色變化。
終止反應(yīng)：加入終止液，使顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
讀數(shù)測量：在450nm波長下測定OD值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
三、樣本檢測
樣本稀釋：根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定樣本的較佳稀釋比例。
加樣步驟：同標(biāo)準(zhǔn)品一樣，將稀釋后的樣本加入微孔板中，每個(gè)樣本同樣設(shè)置復(fù)孔。
后續(xù)處理：重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制中的孵育、洗滌、顯色及終止反應(yīng)步驟。
四、數(shù)據(jù)處理
標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合：利用Excel或其他專業(yè)軟件，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸，對應(yīng)OD值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程。
樣本濃度計(jì)算：將待測樣本的OD值代入回歸方程中，求得相應(yīng)濃度值。
結(jié)果校正：考慮到樣本稀釋倍數(shù)，較終結(jié)果應(yīng)乘以相應(yīng)系數(shù)。
五、操作技巧分享
加樣技巧：加樣時(shí)動(dòng)作要輕柔，避免產(chǎn)生氣泡或交叉污染。
溫育控制：確保每次溫育時(shí)間一致，溫度波動(dòng)不超過±1℃。
洗滌：洗板過程中應(yīng)充分瀝干，防止殘留液體影響結(jié)果。
讀數(shù)及時(shí)：加入終止液后應(yīng)立即進(jìn)行讀數(shù)，以免顏色變化影響準(zhǔn)確性。
重復(fù)性驗(yàn)證：每個(gè)樣本至少重復(fù)檢測兩次，計(jì)算平均值以提高結(jié)果可信度。
通過上述步驟，我們可以較為完整地掌握人內(nèi)皮素ELISA試劑盒的操作流程。需要注意的是，在實(shí)際操作過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，佩戴好個(gè)人防護(hù)裝備，確保實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。此外，由于不同品牌試劑盒的具體操作細(xì)節(jié)可能存在差異，使用前務(wù)必仔細(xì)閱讀說明書，并根據(jù)自身情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。
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